溶液中待測(cè)物分子中的價(jià)電子能夠選擇性地吸收紫外或可見光，從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)，形成紫外可見吸收光譜，根據(jù)紫外可見吸收光譜中的吸收峰和摩爾吸收系數(shù)，進(jìn)行定性分析。這就是化學(xué)試劑分子吸收的測(cè)定方法——分光光度法，本文對(duì)這種方法進(jìn)行了詳細(xì)介紹。

1. 吸收曲線法

使用自動(dòng)記錄型儀器時(shí)，可自動(dòng)掃描繪出吸收曲線。

使用非自動(dòng)記錄型儀器時(shí)，在規(guī)定的波長(zhǎng)范圍時(shí)，每隔5nm~10nm測(cè)定一次吸光度，在吸收峰附近時(shí)，應(yīng)每隔1nm~2nm測(cè)定一次，以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制吸收曲線。

此方法可適用于定性分析、最大吸收波長(zhǎng)的測(cè)定。

?2. 工作曲線法

按產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定配制四個(gè)以上濃度成適當(dāng)比例的標(biāo)準(zhǔn)溶液，以空白溶液（或溶劑）為參比溶液，同時(shí)用空白溶液（或溶劑）的吸光度進(jìn)行校正。在規(guī)定波長(zhǎng)下，分別測(cè)定吸光度。以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度c為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制工作曲線，同時(shí)配制適當(dāng)濃度的樣品溶液，在上述條件下測(cè)定吸光度，并在工作曲線上查出待測(cè)物濃度（圖1），待測(cè)物的濃度應(yīng)在工作曲線范圍內(nèi)。該溶液濃度也可根據(jù)測(cè)定的吸光度用回歸方程法計(jì)算。此方法適用于雜質(zhì)含量的測(cè)定。

?3. 分光光度法含量測(cè)定

按產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)給出的方法測(cè)定。特效試劑可在規(guī)定條件下與被測(cè)物生成有色配位化合物，測(cè)定其溶液的吸光度，按標(biāo)準(zhǔn)中給出的換算系數(shù)計(jì)算含量，也可用標(biāo)準(zhǔn)樣品對(duì)照法進(jìn)行計(jì)算；某些酸堿指示劑可采用柱層析法將雜質(zhì)分離后測(cè)主體溶液的吸光度，用標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法計(jì)算含量。

4. 摩爾吸收系數(shù)測(cè)定

按產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定條件測(cè)定。

摩爾吸收系數(shù)E，數(shù)值以L/（cm*mol）表示，按式（2）計(jì)算：

?

式中：

A——吸光度的數(shù)值；c——被測(cè)物的物質(zhì)的量濃度的數(shù)值，單位為摩爾每升（mol/L）；b—光路長(zhǎng)度（即吸收池厚度）的數(shù)值，單位為厘米（cm）。

?

5. 靈敏度測(cè)定

按產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定條件測(cè)定。靈敏度可用摩爾吸收系數(shù)表示。

6. 質(zhì)量吸收系數(shù)測(cè)定按產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定條件測(cè)定

質(zhì)量吸收系數(shù)a，數(shù)值以L/（cm*g）表示，按式（3）計(jì)算：

?

A——吸光度的數(shù)值；

p——被測(cè)物的質(zhì)量濃度的數(shù)值，單位為克每升（g/L）；

b——光路長(zhǎng)度（即吸收池厚度）的數(shù)值，單位為厘米（cm）。